Комплект Cell Direct RT qPCR—SYBR GREEN I Комплекти за директен клетъчен лизис Cell Ready Едноетапни qRT-PCR комплекти
Описания
Този комплект използва уникална буферна система за лизис, която може бързо да освободи РНК от култивирани клетъчни проби за RT-qPCR реакции, като по този начин елиминира отнемащия време и трудоемък процес на пречистване на РНК.Шаблонът на РНК може да бъде получен само за 7 минути.5×Директен RT микс и 2×Реагентите Direct qPCR Mix-SYBR, предоставени от комплекта, могат бързо и ефективно да получат количествени PCR резултати в реално време.
5×Директен RT микс и 2×Direct qPCR Mix-SYBR има силна толерантност към инхибитори и лизатът от пробите може да се използва като шаблон за RT-qPCR директно.Този комплект съдържа уникалната RNA обратна транскриптаза Foregene с висок афинитет и Hot D-Taq ДНК полимераза, dNTPs, MgCl2, реакционен буфер, PCR оптимизатор и стабилизатор.
Спецификации
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Компоненти на комплекта
| Част I | Буфер CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Буфер ST | |
| Част II | ДНК изтривач |
| 5× Директен RT микс | |
| 2× Директен qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX референтна боя | |
| ddH2O без РНКаза | |
| Инструкции | |
Характеристики и предимства
■Лесно и ефективно: с технологията Cell Direct RT, РНК проби могат да бъдат получени само за 7 минути.
■ Търсенето на проби е малко, могат да бъдат тествани само 10 клетки.
■ Висока производителност: може бързо да открие РНК в клетки, култивирани в 384, 96, 24, 12, 6-ямкови плаки.
■ DNA Eraser може бързо да премахне освободените геноми, значително да намали въздействието върху последващите експериментални резултати.
■ Оптимизираната RT и qPCR система прави двуетапната RT-PCR обратна транскрипция по-ефективна и PCR по-специфична и по-устойчива на инхибитори на RT-qPCR реакцията.
Приложение на комплекта
Обхват на приложение: култивирани клетки.
- РНК, освободена чрез лизис на пробата: приложимо само за RT-qPCR шаблона на този комплект.
- Комплектът може да се използва за следните цели: анализ на генната експресия, проверка на ефекта на заглушаване на гена, медииран от siRNA, скрининг на лекарства и др.
Диаграма
Съхранение и срок на годност
Част I от този комплект трябва да се съхранява при 4 ℃;Част II трябва да се съхранява при -20 ℃.
Foregene Protease Plus II трябва да се съхранява при 4℃, не замръзвайте при -20 ℃.
Реагент 2×Direct qPCR Mix-SYBR трябва да се съхранява при -20℃на тъмно;ако се използва често, може да се съхранява и на 4℃ за краткосрочно съхранение (използвайте в рамките на 10 дни).
Принципи на проектиране на праймер за PCR в реално време
Преден грунд и обратен грунд
За PCR в реално време дизайнът на праймера е много важен.Праймерите са свързани със спецификата и ефективността на PCR амплификацията и могат да бъдат проектирани с позоваване на следните принципи:
Дължина на грунда: 18-30 bp.
GC съдържание: 40-60%.
Стойност на Tm: Софтуерът за проектиране на праймер, като Primer 5, може да даде стойността на Tm на праймера.Стойностите на Tm на праймерите нагоре и надолу по веригата трябва да бъдат възможно най-близки.Може да се използва и формулата за изчисление на Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Когато се извършва PCR, температура под стойността на Tm на праймера от 5 °C обикновено се избира като температура на отгряване (съответното повишаване на температурата на отгряване може да увеличи специфичността на PCR реакцията).
Праймери и PCR продукти:
Дължината на продукта за PCR амплификация на праймер за проектиране е за предпочитане 100-150 bp.
Грундовете за проектиране във вторичната структурна област на шаблона трябва да се избягват, доколкото е възможно.
Избягвайте образуването на 2 или повече комплементарни бази между 3' краищата на праймерите нагоре и надолу по веригата.
Терминалната основа на праймер 3' не може да присъства с 3 допълнителни последователни G или C.
Самите праймери не могат да имат комплементарни структури, в противен случай ще се образува структура на фиби, засягаща PCR амплификацията.
ATCG трябва да бъде разпределен възможно най-равномерно в последователността на праймера и 3' терминалната база трябва да се избягва, тъй като T.
Приложение 1：Допълнителен пакет от компоненти Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Разтвор за клетъчен лизис
|
| |||
| Компоненти на комплекта (24-ямкова лизираща система/ямка) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 т | 500 т | ||
| Частаз | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Буфер ST | 1 ml × 2 | 10 мл | |
| ЧастII | ДНК изтривач | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT микс
|
| |
| Компоненти на комплекта (20 μl реакционна система) | DRT-01011-B1 |
| 200 т | |
| 5× Директен RT микс | 800 μl |
| ddH без РНКаза2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Компоненти на комплекта (20 μl реакционна система) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 т | 1000 т | |
| 2× Директен qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX референтна боя | 40 μl | 200 μl |
| ddH без РНКаза2O | 1,7 мл | 10 мл |
Ръководства за употреба:
