(96 ямки) комплект QuickEasy Cell Direct RT-qPCR – SYBR Green I
Описания
The(96-ямка) QuickEasyTM Комплект Cell Direct RT-qPCR–SYBR Green Iосигурявауникална буферна система за лизисto бързо освобождаване на РНКот култивирана клеткапроби за RT-qPCR реакции, елиминирайки отнемащото време и трудаПроцес на пречистване на РНК и отнема само 7 минути за получаване на необходимия шаблон на РНК.The5× Директен RT микси2× Директен qPCR Mix-SYBRпредоставена в кутията може бързо иефективно получаване на количествени данни в реално времеPCR резултати.
5× Direct RT Mix и 2× Direct qPCR Mix-SYBR имат силна инхибиторна толерантност и могат да използват лизата на пробата, която ще се тества като шаблон за ефективна обратна транскрипция и специфична амплификация.Реагентът съдържа Foregene уникална обратна транскриптаза с висок афинитет към РНК, както и Hot D-Taq ДНК полимераза, dNTPs, MgCl2 , реакционен буфер, PCR оптимизатор и стабилизатор и може да се използва заедно с лизисния буфер за бързо, лесно и точно откриване на пробата и има характеристиките на висока чувствителност, силна специфичност и добра стабилност.
Комплектът е насочен към микросистемен лизис на 96-ямкови култивирани клетки и има добра еднородност и консистенция;компонентите на комплекта осигуряват 96 реакции на лизис, 96 реакции на обратна транскрипция и 96×2 qPCR реакции, които могат да отговорят на 96-ямковата клетъчна плака за еднократна употреба, избягвайки замърсяването, причинено от многократно отваряне, замразяване и размразяване на реагенти и влошаване на ефективността на реагента.
Компоненти на комплекта
| Състав на комплекта ( 50 μL система за лизис/20 μLRT реакционна система /20μL qPCR реакционна система) | DRT-03011 | Забележка | |
| 96T | |||
| ЧастI | БуферCL | 5 мл | клеткализис |
| ForegineПротеаза плюс II | 100 μL | ||
| БуферST | 500 μL | ||
| Част II | ДНКГумичка | 100 μL | |
| 5× Директен RT микс | 400 μL | RT | |
| 2 × Директен qPCR микс-SYBR | 1 мL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX референтна боя | 400µL | ||
| РНКаза- БезплатноddH2 O | 1,7 мл |
| |
| Mгодишен | 1 парче | 1 порция | |
*: Лизисният реагент DNA Eraser е включен в част II на комплекта;Компонентите за клетъчен лизис, RT и qPCR могат да бъдат закупени отделно.
Характеристики и предимства
■Лесно и ефективно: с технологията Cell Direct RT, РНК проби могат да бъдат получени само за 7 минути.
■ Търсенето на проби е малко, могат да бъдат тествани само 10 клетки.
■ Висока производителност: може бързо да открие РНК в клетки, култивирани в 384, 96, 24, 12, 6-ямкови плаки.
■ DNA Eraser може бързо да премахне освободените геноми, значително да намали въздействието върху последващите експериментални резултати.
■ Оптимизираната RT и qPCR система прави двуетапната RT-PCR обратна транскрипция по-ефективна и PCR по-специфична и по-устойчива на инхибитори на RT-qPCR реакцията.
Приложение на комплекта
Обхват на приложение: култивирани клетки.
- РНК, освободена чрез лизис на пробата: приложимо само за RT-qPCR шаблона на този комплект.
- Комплектът може да се използва за следните цели: анализ на генната експресия, проверка на ефекта на заглушаване на гена, медииран от siRNA, скрининг на лекарства и др.
Съхранение и срок на годност
Част I от този комплект трябва да се съхранява на 4℃;Част II трябва да се съхранява при -20 ℃.
Foregene Protease Plus II трябва да се съхранява при 4℃, не замръзвайте при -20 ℃.
Реагент 2×Direct qPCR Mix-Taqman трябва да се съхранява при -20℃на тъмно;ако се използва често, може да се съхранява и на 4℃ за краткосрочно съхранение (използвайте в рамките на 10 дни).
Принципи на проектиране на праймер за PCR в реално време
Преден грунд и обратен грунд
За PCR в реално време дизайнът на праймера е много важен.Праймерите са свързани със спецификата и ефективността на PCR амплификацията и могат да бъдат проектирани с позоваване на следните принципи:
- Дължина на грунда: 18-30 bp.
- GC съдържание: 40-60%.
- Стойност на Tm: Софтуерът за проектиране на праймер, като Primer 5, може да даде стойността на Tm на праймера.Стойностите на Tm на праймерите нагоре и надолу по веригата трябва да бъдат възможно най-близки.Може да се използва и формулата за изчисление на Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Когато се извършва PCR, температура под стойността на Tm на праймера от 5 °C обикновено се избира като температура на отгряване (съответното повишаване на температурата на отгряване може да увеличи специфичността на PCR реакцията).
- Праймери и PCR продукти:
- Дължината на продукта за PCR амплификация на праймер за проектиране е за предпочитане 100-150 bp.
- Грундовете за проектиране във вторичната структурна област на шаблона трябва да се избягват, доколкото е възможно.
- Избягвайте образуването на 2 или повече комплементарни бази между 3' краищата на праймерите нагоре и надолу по веригата.
- Терминалната основа на праймер 3' не може да присъства с 3 допълнителни последователни G или C.
- Самите праймери не могат да имат комплементарни структури, в противен случай ще се образува структура на фиби, засягаща PCR амплификацията.
- ATCG трябва да бъде разпределен възможно най-равномерно в последователността на праймера и 3' терминалната база трябва да се избягва, тъй като T.
Приложение1: Cell DirectRT-qPCR Комплект компонентиt добавка пакет
1. Разтвор за клетъчен лизис
| Разтвор за клетъчен лизис | |||
| Компоненти на комплекта (24-ямкова лизираща система/ямка) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 т | 500 т | ||
| Частаз | Буфер CL | 20 мл | 100 мл |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Буфер ST | 1 ml × 2 | 10 мл | |
| ЧастII | ДНК изтривач | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT микс | |
| Компоненти на комплекта (20 μl реакционна система) | DRT-01011-B1 |
| 200 т | |
| 5× Директен RT микс | 800 μl |
| ddH без РНКаза2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR микс | ||
| Компоненти на комплекта (20 μl реакционна система) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 т | 1000 т | |
| 2 × Директен qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX еталонно багрило | 40 μl | 200 μl |
| ddH без РНКаза2O | 1,7 мл | 10 мл |
Ръководства за употреба:
