Комплект за изолиране на тотална РНК от животни Комплекти за екстракция и пречистване на тотална РНК за животински тъкани и клетки
Описание на комплекта:
Бързо и ефикасно извличане на обща РНК с висока чистота и високо качество от различни животински тъкани.
Няма нужда да се притеснявате за разграждането на РНК.Цялата система е без RNase
Ефективно премахване на ДНК с помощта на DNA-Cleaning Column
Отстранете ДНК без добавяне на ДНКаза
Лесно—всички операции се извършват при стайна температура
Бързо—операцията може да бъде завършена за 30 минути
Безопасен - не се използва органичен реагент
Висока чистота—OD260/280≈1.8-2.1
Описания на комплекти
50 Preps, 200 Preps
Този комплект използвавъртяща се колона и формуларазработена от нашата компания, която може да извлича обща РНК с висока чистота и високо качество от различни животински тъкани с висока ефективност. Осигурява ефективна колона за почистване на ДНК, която може лесно да отделя и адсорбира геномна ДНК от супернатантата и тъканния лизат, просто и спестяващо време;Колоната само за РНК може ефективно да свързва РНК и може да се обработва едновременно с уникална формула Много проби.
Цялата система е без РНКаза, така че извлечената РНК не се разгражда;Buffer RW1, Buffer RW2 система за промиване на буфер, така че получената РНК да е без замърсяване с протеини, ДНК, йони и органични съединения.
Компоненти на комплекта
| Комплект за изолиране на тотална РНК от животни | ||
| Компоненти на комплекта | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 т | 200 т | |
| Буфер RL1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер RL2 | 15 мл | 60 мл |
| Буфер RW1* | 25 мл | 100 мл |
| Буфер RW2 | 24 мл | 96 мл |
| ddH2O без РНКаза | 10мл | 40 мл |
| Колона само за РНК | 50 | 200 |
| Колона за почистване на ДНК | 50 | 200 |
| Инструкция за употреба | 1 парче | 1 парче |
Информация за продукта
| формат | Спин колона | Пречистващ компонент | Foregene колона, реагент |
| Поток | 1-24 проби | Време за подготовка | ~30 минути (24 проби) |
| Центрофуга | Настолна центрофуга | Пиролизно отделяне | Центробежно разделяне |
| проба | Животински тъкани;клетка | Количество на пробите | Тъкан:10-20 mg;Клетка:(1-5)×106 |
| Обем на елуиране | 50-200 μL | Максимален обем на зареждане | 850 μL |
Характеристики и предимства
■ Няма нужда да се тревожите за разграждането на РНК;цялата система е без РНКаза
■ Ефективно премахване на ДНК чрез DNA-Cleaning Column
■ Премахване на ДНК без добавяне на ДНКаза
■ Прости - всички операции се извършват при стайна температура
■ Бързо - операцията може да бъде завършена за 30 минути
■ Безопасен - не е необходим органичен реагент
■ Висока чистота -OD260/280≈1.8-2.1
Приложение на комплекта
Подходящ е за извличане и пречистване на обща РНК от различни пресни или замразени животински тъкани или култивирани клетки.
Параметри на продукта
■ Приложения надолу по веригата: синтез на cDNA на първата верига, RT-PCR, молекулярно клониране, Northern Blot и др.
■ Проби: животински тъкани, култивирани клетки
■ Дозировка: Тъкани 10-20 mg, клетки (2-5) × 106
■ Максимален ДНК свързващ капацитет на колоната за пречистване: 80 μg
■ Обем на елуиране: 50-200 μl
Диаграма
Комплект за изолиране на обща РНК от животни, третиран с 20 mg
Пресни проби от мишки, вземете 5% пречистена обща РНК 1% агар
Електрофореза с гликогел
1: Далак 2: Бъбрек
3: Черен дроб 4: Сърце
Съхранение и срок на годност
Комплектът може да се съхранява 24 месеца при стайна температура (15–25 ℃) или 2–8 ℃ за по-дълго време.Буферът RL1 може да се съхранява при 4 ℃ за 1 месец след добавяне на β-меркаптоетанол (по избор).
Цитирани статии
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Заредени с иРНК липидоподобни наночастици за редактиране на чернодробна основа чрез оптимизиране на централен композитен дизайн.адв.Функц.Матер.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J и др.Спонтанната апоптоза на клетките в терапевтичния препарат на стволови клетки упражнява имуномодулиращи ефекти чрез освобождаване на фосфатидилсерин.Signal Transduct Target Ther.14 юли 2021 г.; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17,97: Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Модификацията на N7-метилгуанозин тРНК подобрява транслацията на онкогенната иРНК и насърчава прогресията на интрахепаталния холангиокарцином.Mol Cell.29 юли 2021 г.: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF: 9,225: Cao X, Shu Y, Chen Y и др.Mettl14-медиирана m6A модификация улеснява регенерацията на черния дроб чрез поддържане на хомеостазата на ендоплазмения ретикулум.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021; 12 (2): 633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Комплекти за изолиране на РНК за други примерни източнициса налични:
Клетка, растение, вирус, кръв и др.
РНК не се екстрахира или добивите на РНК са ниски
Често има различни фактори, които влияят на ефективността на възстановяването, като: съдържание на РНК в тъканна проба, метод на работа, обем на елуиране и др.
1. По време на работа беше извършено центрофугиране в ледена баня или криогенно (4 °C).
Препоръка: Работете при стайна температура (15-25 °C) през целия процес, без ледена баня и центрофуга при ниски температури.
2. Неправилно съхранение на пробата или прекомерно дълго време за съхранение на пробата.
Препоръка: Съхранявайте пробите при -80 °C или замразявайте в течен азот и избягвайте многократно използване при замразяване-размразяване;опитайте се да използвате прясна тъкан или култивирани клетки за екстракция на РНК.
3. Недостатъчен лизис на пробата.
Препоръка: Когато хомогенизирате тъкан, уверете се, че тъканта е достатъчно хомогенизирана и че тъканните клетки са достатъчно разделени, за да се обясни освобождаването на РНК.
4. Елуентът не е добавен правилно.
Препоръка: Потвърдете, че ddH без РНКаза2O се добавя на капки към средата на мембраната на колоната за пречистване.
5. Правилният обем абсолютен етанол не е добавен към буфер RL2 или буфер RW2.
Препоръка: Следвайте инструкциите, добавете правилния обем абсолютен етанол към буфер RL2 и буфер RW2 и разбъркайте добре преди да използвате комплекта.
6. Дозировката на тъканната проба не е подходяща.
Препоръка: Използвайте 10-20 mg тъкан или (1-5) × 106клетки на 500 μl буфер RL1, тъй като прекомерната употреба на тъкан може да доведе до намалена екстракция на РНК.
7. Неправилен обем на елуиране или непълно елуиране.
Препоръка: Обемът на елуиране на колоната за пречистване е 50-200 μl;ако ефектът на елуиране не е задоволителен, се препоръчва да се удължи времето за поставяне при стайна температура след добавяне на предварително загрят ddH без РНКаза2O, например за 5-10 минути.
8. Колоната за пречистване има остатък от етанол след промиване с буфер RW2.
Препоръка: Ако има остатък от етанол след промиване с буфер RW2, центрофугиране на празна епруветка за 1 минута, времето за операция на центрофугиране на празна епруветка може да се увеличи до 2 минути или колоната за пречистване може да се постави на стайна температура за 5 минути, за да се отстрани адекватно остатъчният етанол.
Пречистената РНК се разгражда
Качеството на пречистената РНК е свързано с фактори като запазване на пробата, замърсяване с РНКаза и манипулация и др.
1. Тъканните проби не се съхраняват навреме.
Препоръка: Ако тъканни проби или клетки не се използват своевременно след вземането им, незабавно криоконсервирайте при -80 °C или течен азот.За да извлечете РНК, използвайте нововзета проба от тъкан или клетка, когато е възможно.
2. Многократно замразяване-размразяване на тъканни проби.
Препоръка: Когато съхранявате тъканни проби, най-добре е да ги нарежете на малки парчета за консервиране и да премахнете едно от парчетата, когато ги използвате, за да избегнете повторно замразяване-размразяване на пробата и разграждането на РНК.
3. РНКаза се въвежда или не се носят еднократни ръкавици, маски и др. по време на операцията.
Препоръка: Експериментите за екстракция на РНК се извършват най-добре в отделни стаи за манипулиране на РНК и масата се изчиства преди експеримента.
Носете ръкавици и маски за еднократна употреба по време на експеримента, за да сведете до минимум разграждането на РНК, причинено от въвеждането на РНКаза.
4. Реагентите са замърсени с РНКаза по време на употреба.
Препоръка: Заменете с нов комплект за изолиране на обща РНК от животни за свързани експерименти.
5. Центрофужните епруветки, накрайници и т.н., използвани при манипулиране на РНК, са замърсени с РНКаза.
Препоръка: Уверете се, че всички центрофужни епруветки, накрайници, пипети и др., използвани при екстракцията на РНК, не съдържат РНКаза.
Пречистената получена РНК влияе върху експериментите надолу по веригата
РНК, пречистена от колоната за пречистване, ако солните йони, съдържанието на протеин е твърде голямо, ще повлияе на експеримента надолу по веригата, като например: обратна транскрипция, Northern Blot et al.
1. Елуираната РНК има остатъци от солни йони.
Препоръка: Потвърдете, че правилният обем етанол е добавен към буфер RW2 и извършете 2 промивки на пречистващата колона при центробежната скорост, посочена за работа;ако има някакъв остатък от солеви йони, оставете колоната за пречистване на буфер RW2 за 5 минути при стайна температура и извършете центрофугиране, за да увеличите максимално отстраняването на замърсяването със сол.
2. Етанолов остатък в елуирана РНК.
Препоръка: Потвърдете, че след промиване с буфер RW2 извършете операцията по центрофугиране на празна епруветка при скоростта на центрофугиране, посочена за работа, увеличете времето на операцията по центрофугиране на празна епруветка до 2 минути, ако все още има остатък от етанол, или го оставете на стайна температура за 5 минути след центрофугирането на празната епруветка, за да увеличите максимално отстраняването на остатъка от етанол.
