Директен комплект RT-qPCR
Описание на комплекта:
◮ Директен RT-qPCR комплект, използващ Foreasy обратна транскриптаза и Foreasy HS Taq ДНК полимераза, разработени от Foregene, с уникален реакционен буфер, прави този комплект със силна устойчивост и съвместимост и може директно да тества реакцията, използвайки системата Foregene Lysis като шаблон.Този комплект може да се прилага за комплект за откриване на нуклеинова киселина на COVID-19 и разработване на комплект за откриване на нуклеинова киселина от патогенни бактерии.
Описание
Комплектът Direct RT-qPCR осигурява отделно опакован RT-qPCR буфер и високоефективен ензимсмес (Taq、M-MLV、RI), което я прави удобна за създаване на резервни комплекти и системакорекция, в рамките на проста проверка.
Спецификации
500T, 50 000T
Компоненти на комплекта
| Съдържание на комплекта (20 μL реакционна система) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
| 500 т | 50 000 т | |
| Директна ензимна смес | 500 μL×1 | 50 мл×1 |
| 2 × Директен RT-qPCR буфер | 1 мл×5 | 500 мл×1 |
| Инструкция | 1 | 1 |
Оперативни стъпки
Преди приготвянето на реагента, всички реагенти в комплекта трябва да се размразят при стайна температура и внимателно да се смесят.
A: приготви се of шаблон и реагент
1. Подгответе подготвена РНК матрица (Препоръчително е да използвате Foregene Total RNA Isolation Kit комплект за извличане и пречистване на РНК матрица) или продукт за крекинг на проба (Препоръчително е да използвате Foregene Lysis система), специфични праймери (10 μM) и други подходящи консумативи, инструмент.
2. Поставете 2× директен RT-qPCR буфер, свободен от РНКаза ddH2O и 20× ROX референтна боя (ако има'необходими) в кутията с лед, като ги накарате да се разтопят естествено и внимателно ги смесете.
B: приготви се of RT-qPCR система
Таблица 1 : приготви се of RT-qPCR sсистема
| Компонент | Сила на звука | Крайна концентрация |
| 2 × Директен RT-qPCR буфер | 10 μL | 1× |
| Директна ензимна смес | 1μL | |
| Преден праймер (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Обратен праймер (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Сонда (4 μM) | 1μL | 200nM |
| Шаблон (РНК или лизат) | X μL | |
| 20×ROX референтна боя | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Общ обем | 20μL |
C: Комплект на RT-qPCR реакция програма
Таблица 2 : RT-qPCR реакцияon програма настройка (за пример: две-стъпка метод)
| стъпка | температура | време | Цикли | Съдържание | |
| 1 | 50 ℃ | 15 мин | 1* | 1 | Обратна транскрипция |
| 2 | 95 ℃ | 1 минута | 1 | Предварителна денатурация | |
| 3 | 95 ℃ | 10 сек | 40-45 | Денатурация | |
| 60 ℃ | 30 сек. 2* | Отгряване/удължаване | |||
Съхранение и срок на годност
-Комплектът трябва да се съхранява при -20± 5℃.Срокът на валидност е 12 месеца.
-Избягвайте повтарящи се цикли на замразяване-размразяване (<5 цикъла).
