Директен RT-qPCR комплект III
Описание на комплекта:
◮Директен RT-qPCR комплект, използващ Foreasy обратна транскриптаза и Foreasy HS Taq ДНК полимераза, разработени от Foregene, с уникален реакционен буфер, прави този комплект със силна устойчивост и съвместимост и може директно да тества реакцията, използвайки системата Foregene Lysis като шаблон.Този комплект може да се прилага за комплект за откриване на нуклеинова киселина на COVID-19 и разработване на комплект за откриване на нуклеинова киселина от патогенни бактерии.
Описание
Комплектът Direct RT-qPCR осигурява отделно опакован RT-qPCR буфер (със смесена ДНК полимераза Foreasy HS Taq) и високоефективенForeasy обратна транскриптаза (MMLV),което го прави удобен за създаване на резервни комплекти и настройка на системата, в рамките на проста проверка.
Директен RT-qPCR комплект, използващ Foreasy обратна транскриптаза и Foreasy HS Taq ДНК полимераза, разработени от Foregene, с уникален реакционен буфер, прави този комплект със силна устойчивост и съвместимост и може директно да тества реакцията, използвайки системата Foregene Lysis като шаблон.Този комплект може да се прилага за комплект за откриване на нуклеинова киселина на COVID-19 и разработване на комплект за откриване на нуклеинова киселина от патогенни бактерии.
Този комплект може директно да бъде компонент на продукта IVD, като се използва лесно и бързо.Има нужда само от лесна проверка, без да се развива отново.
Спецификации
500T, 50 000T
Компоненти на комплекта
| Съдържание на комплекта (20 μL реакционна система) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 т | 50 000 т | |
| Форези Робратна транскриптаза(200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 мл×5 |
| 2× Директен qPCRМикс-Такман | 1 мл × 5 | 500 мл×1 |
| Инструкция | 1 | 1 |
Оперативни стъпки
A: Подгответе шаблон и реагент
1. Подгответе подготвена РНК матрица (Препоръчително е да използвате Foregene Total RNA Isolation Kit комплект за извличане и пречистване на РНК матрица) или продукт за крекинг на проба (Препоръчително е да използвате Foregene Lysis система), специфични праймери (10 μM) и други подходящи консумативи, инструмент.
2. Поставете 2× директен RT-qPCR буфер, ddH2O без RNase и 20× ROX референтно багрило (ако е необходимо) в кутията с лед, като ги накарате да се стопят естествено и внимателно ги смесете.
B: Подгответе RT-qPCR система
Вземете половината от обема на реакционния буфер на реакционната система (например, ако обемът на системата е 20 μL, трябва да получи 10 μL 2 × директен RT-qPCR буфер). Засъответното количество ензим, предлагаме товаM-MLV: 10-30 U/20 μL реакционна система,TaqДНК полимераза:1-2 U/20 μL реакционна систематова е нашето предложение, трябва да го тествате и коригирате), добавете РНК шаблон, специфични праймери и сонди и добавете ddH без РНКаза2O до 20 μL.Специфичното приготвяне на RT-qPCR реакционна система може да се направи в следната таблица 1.
Таблица 1: Подготовка на RT-qPCR система
| Компонент | Сила на звука | Крайна концентрация |
| 2 × Директен RT-qPCR буфер | 10 μL | 1× |
| Foreasy обратна транскриптаза (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq ДНК полимераза | 1-2 U | |
| Преден праймер (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Обратен праймер (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Сонда (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Шаблон (РНК или лизат) | X μL | |
| 20 × ROX еталонно багрило | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Общ обем | 20 μL |
Забележка: Правият праймер и обратният праймер са специфични праймери на целевия ген.Системата на qPCR може да бъде коригирана според практически експериментални и PCR модели.Препоръчваме 400 nM за крайна концентрация на повечето праймери.Регулирайте обема на специфичните праймери и сонди според приготвената концентрация и препоръчителната крайна концентрация, моля.
1*: Изберете подходяща крайна концентрация на ROX Reference Dye според различни количествени PCR инструменти.Оптималната концентрация на референтно багрило ROX на обичайните количествени PCR инструменти е показана в таблицата по-долу:
| Количествени PCR инструменти | Крайна концентрация на ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Първа стъпка,и т.н. | 1 × (например добавете 1 μl 20 × ROX Reference Dye в 20 μL реакционна система) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P и Mx4000 и др. | 0,5 × (например добавете 0,5 μl 20 × ROX Reference Dye в 20 μL реакционна система) |
| Roche PCR инструмент, Bio-Rad PCR инструмент, Eppendorf количествен PCR инструмент и др. | Без ROX Reference Dye |
Съхранение и срок на годност
Комплектът трябва да се съхранява при -20 ± 5℃.Трябва незабавно да се съхранява в -20℃ термостатен хладилник.Срокът на годност е 2 години, ако се съхранява в подходящи условия.
