Ръководство за анализ на проблеми

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Нисък добив или липса на ДНК

Обикновено има много фактори, които влияят върху добива на геномна ДНК, включително източника на пробата, възрастта на пробата, условията на съхранение на пробата и операцията.

Геномна ДНК не може да бъде получена по време на екстракцията

1. Тъканните проби се съхраняват неправилно или се съхраняват твърде дълго, което води до разграждане на геномната ДНК.

Препоръка: Съхранявайте тъканните проби в течен азот или -20°° С;опитайте се да използвате новосъбрани проби за извличане на геномна ДНК.

2. Твърде малко количество проба може да доведе до невъзможност за извличане на съответната геномна ДНК.

Предложение: За тъканни проби, които са били съхранявани дълго време или имат сериозно разграждане на геномна ДНК, количеството на тъканните проби може да бъде подходящо увеличено, за да се извлече значителна геномна ДНК.Количеството на пробата може да се определи според нуждите на ДНК, но свежата проба не трябва да надвишава 100 mg, а сухата проба не трябва да надвишава 30 mg.

3. Пробата не се смила с течен азот или не се поставя твърде дълго след течен азот.

Предложение: По време на екстракцията на ДНК, пробата трябва да бъде напълно смляна с течен азот, за да се разруши клетъчната стена;след смилане, моля прехвърлете пробата на прах в PL1, предварително загрята на 65°C възможно най-скоро (след като смленият прах се разтопи, геномната ДНК ще започне да се разгражда бързо) .

4. Неправилното съхранение на Foregene Protease води до намалена или инактивирана активност.

Препоръка: Потвърдете условията за съхранение на Foregene Protease или я заменете с нова Foregene Protease за ензимна хидролиза.

5. Комплектът е съхраняван неправилно или е съхраняван твърде дълго, което води до повреда на някои компоненти в комплекта.

Препоръка: Закупете нов комплект за извличане на геномна ДНК от растения за свързани операции.

6. Неправилно използване на комплекта.

Предложение: Закупете комплект за изолиране на растителна ДНК, предназначен за проби за екстракция и пречистване на растителна геномна ДНК.

7. Буфер WB без добавяне на aбезводен етанол.

Препоръка: Уверете се, че сте добавили правилния обем абсолютен етанол към Buffer WB.

8. Елуентът не е накапван правилно върху силициевата мембрана.

Предложение: Добавете предварително загрятия елуент при 65℃на капки до средата на мембраната от силикагел и го оставете на стайна температура за 5 минути, за да увеличите ефективността на елуиране.

Екстракция за получаване на геномна ДНК с нисък добив

1. Пробата се съхранява неправилно или се съхранява твърде дълго, което води до разграждане на геномната ДНК.

Препоръка: Съхранявайте тъканните проби при -20℃;опитайте се да използвате новосъбрани тъканни проби за извличане на геномна ДНК.

2. Ако количеството тъканни проби е твърде малко, извлечената геномна ДНК ще бъде по-малко.

Предложение: Някои растителни проби са богати на вода, като водни растения като водорасли и т.н., дозировката може да се увеличи по подходящ начин или водата може да се дехидратира малко преди операцията.

3. Пробите не са били добре смлени с течен азот или са оставени на стайна температура твърде дълго след смилането.

Предложение: Смилането с течен азот трябва да е достатъчно и клетъчната стена на пробата трябва да бъде счупена колкото е възможно повече;веднага след смилането пробата на прах трябва да се прехвърли в 65℃предварително загрят буфер PL1 за следващата стъпка.

4. Не използвате правилния комплект.

Препоръка: Използвайте специален комплект за изолиране на растителна ДНК, за да извлечете и пречистите растителна геномна ДНК.

5. Неправилното съхранение на Foregene Protease води до намалена или инактивирана активност.

Препоръка: Потвърдете условията за съхранение на Foregene Protease или я заменете с нова Foregene Protease за ензимна хидролиза.

6. Проблем с елуента

Препоръка: Моля, използвайте буфер EB за елуиране;ако използвате ddH₂O или други елуенти, уверете се, че pH на елуента е между 7,0-8,5.

7. Елуентът не е накапан правилно

Предложение: Моля, добавете елюиращата капка в средата на мембраната от силициев диоксид и я оставете на стайна температура за 5 минути, за да увеличите ефективността на елуирането.

8. Обемът на елуента е твърде малък

Предложение: Моля, използвайте елуента за елуиране на геномна ДНК в съответствие с инструкциите, поне не по-малко от 100μl.

Екстрахирана геномна ДНК с ниска чистота

Ниската чистота на геномната ДНК ще доведе до неуспех или слаб ефект от експериментите надолу по веригата, като например: ензимът не може да бъде отрязан и целевият генен фрагмент не може да бъде получен чрез PCR.

1. Разнообразно протеиново замърсяване, РНК замърсяване.

Анализ: Буфер PW не се използва за промиване на колоната;Буфер PW не е използван за промиване на колоната при правилната скорост на центрофугиране.

Предложение: опитайте се да се уверите, че няма утаяване в супернатантата, когато супернатантата преминава през колоната;не забравяйте да измиете колоната за пречистване с буфер PW в съответствие с инструкциите и тази стъпка не може да бъде пропусната.

2. Замърсяване с примесни йони.

Анализ: Промивната колона Buffer WB е пропусната или е промита само веднъж, което води до остатъчно йонно замърсяване.

Препоръка: Не забравяйте да измиете два пъти с Buffer WB според инструкциите, за да премахнете остатъчните йони, доколкото е възможно.

3. Замърсяване с РНКаза.

Анализ: Екзогенна РНКаза се добавя към буфера;неправилна операция на промиване в буфер PW ще доведе до остатъчна РНКаза и ще повлияе на експерименталните операции на РНК надолу по веригата, като например in vitro транскрипция.

Предложение: Комплектите за екстракция на нуклеинови киселини от серията Foregene могат да отстранят РНК без допълнителна РНКаза и всички реагенти в комплекта за изолиране на растителна ДНК не се нуждаят от РНКаза;не забравяйте да измиете колоната за пречистване с буфер PW в съответствие с инструкциите и тази стъпка не може да бъде пропусната.

4. Остатъци от етанол.

Анализ: След промиване на колоната за пречистване с буфер WB, не е извършено центрофугиране на празна епруветка.

Препоръка: Следвайте инструкциите за правилно центрофугиране на празни епруветки.

Инструкция за употреба:

Ръководство с инструкции за комплект за изолиране на растителна ДНК