Ниското съотношение на A260/A230 обикновено се причинява от примеси с максимална дължина на вълната на поглъщане при 230 nm.Нека видим какво включват тези примеси:

• Често срещани замърсители	Дължина на вълната на абсорбция	Ефект на съотношението
  Протеин	~230nm и 280nm	Едновременно намаляване на A260/A 280и А260/A 280съотношения
  Гуанидинова сол	220-240 nm	Намалете А260/A 280съотношение
  Фенол	~270nm	-
  Тризол	~230nm и 270nm	Намалете А260/A 280съотношение
  EDTA	~230nm	Намалете А260/A 280съотношение
  Етанол	230-240 nm	Намалете А260/A 280съотношение

 
 
 
Дължина на вълната на поглъщане и стойност на контраста на обичайните замърсители

Pзамърсяване с протеини
Протеиновото замърсяване може да се счита за най-често срещаното замърсяване в процеса на екстракция на нуклеинова киселина.Протеинът съществува между горната водна фаза и долнатаорганичнифаза .Замърсяването ще намали съотношението на A260/A280 и A260/A230 едновременно, а съотношението на A260/A230 ще се промени по-очевидно от съотношението на A260/A280.
По време на последващитеобратна транскрипцияor qPCR реакции, протеиновите остатъци могат да инхибират или попречат на ензимната функция.Най-добрият начин да избегнете протеиново замърсяване е да имате предвид принципа „по-скоро по-малко, отколкото повече, малко количество много пъти“, когато аспирирате супернатанта.

2. Замърсяване с гуанидиний
хидрохлорид (GuHCl) и гуанидин тиоцианат (GTC) имат ефект на денатуриране на протеини, което може бързо да разруши клетъчните мембрани по време на процеса на екстракция на нуклеинова киселина, причинявайки денатурация на протеини и утаяване.Дължината на вълната на абсорбция на GuHCl и GTC е между 220-240 nm, аостатъчната гуанидиниева сол ще намали съотношението на A260/A230.Въпреки че остатъчната гуанидиниева сол ще намали съотношението,въздействието върху експериментите надолу по веригата всъщност е незначително.

3. Замърсяване с тризол
Основният компонент на Тризол е фенолът.Основната функция на фенола е да лизира клетките и да освобождава протеини и вещества от нуклеинова киселина в клетките.Въпреки че фенолът може ефективно да денатурира протеини, той не може напълно да инхибира активността на РНКазата.Следователно, 8-хидроксихинолин, гуанидин изотиоцианат, β-меркаптоетанол и др. се добавят към TRIzol за инхибиране на ендогенна и екзогенна РНКаза.
При извличане на клетъчна РНК, Trizol може бързо да лизира клетките и да инхибира нуклеазата, освободена от клетките, а остатъчният Trizol значително ще намали съотношението на A260/A230.
Метод на обработка: При центрофугиране трябва да се има предвид, че фенолът в Trizol е лесно разтворим във водна фаза при условия на 4° и стайна температура.

4. Остатък от етанол
Етанолът се използва в крайния процес за утаяване на ДНК, докато се разтварят солни йони, които могат да бъдат свързани с ДНК.Дължината на вълната на поглъщане на най-високатапик на абсорбция наетанолът също е при 230-240 nm, коетосъщо ще намали съотношението на A260/A230.
Методът за избягване на остатъците от етанол може да се повтори два пъти по време на окончателното елуиране, вдухвайкиаспираторза две минути, за да позволите на етанола да се изпари напълно, преди да добавите буфер за елуиране.
Трябва обаче да се знае, че съотношението е само показател за оценка на качеството на РНК.Ако гореспоменатите операции са строго регулирани, отклонението между съотношението и стандартния диапазон няма да окаже голямо влияние върху експериментите надолу по веригата.
Свързани продукти:
Комплект за изолиране на тотална РНК от животни
Комплект за изолиране на обща растителна РНК
Комплект за изолиране на тотална клетъчна РНК
Plant Total RNA Isolation kit Plus