Комплект за изолиране на ДНК с букален тампон/FTA карта Комплект за извличане или пречистване на геномна ДНК от букални тампони
Описание на комплекта:
Бързо пречиствайте висококачествена геномна ДНК от проби от букален тампон/FTA Card.
◮Няма замърсяване с РНКаза:Колоната само за ДНК, предоставена от комплекта, прави възможно премахването на РНК от геномната ДНК без добавяне на РНКаза по време на експеримента, предотвратявайки замърсяването на лабораторията от екзогенна РНКаза.
◮Бърза скорост:Foregene Protease има по-висока активност от подобни протеази и усвоява тъканните проби бързо;операцията е проста и операцията по извличане на геномна ДНК може да бъде завършена в рамките на 20-80 минути.
◮Удобен:Центрофугирането се извършва при стайна температура и няма нужда от нискотемпературно центрофугиране при 4°C или утаяване с етанол на ДНК.
◮Безопасност:Не се изисква екстракция с органичен реагент.
◮Високо качество:Екстрахираната геномна ДНК има големи фрагменти, без РНК, без РНКаза и изключително ниско съдържание на йони, което може да отговори на изискванията на различни експерименти.
◮Система за микроелуиране:Може да увеличи концентрацията на геномна ДНК, което е удобно за откриване надолу по веригата или експеримент.
Описание
Този комплект предоставя ефикасен и бърз метод за получаване на геномна ДНК с висока концентрация от букални тампони и FTA Card (кървави петна).Използване на нашата компания'с уникална центрофугираща колона със силициева мембрана и формула, комбинирана с Foregene Protease, висока концентрация, висококачествена геномна ДНК може да бъде извлечена за 80 минути.Специално проектираната малка колона за пречистване свързва геномна ДНК и ДНК може да се елуира с малко количество (15μl) система за елуиране за увеличаване на концентрацията на получената геномна ДНК, което е удобно за откриване или експеримент надолу по веригата.Комплектът може да обработва една или повече проби наведнъж и процесът на пречистване не изисква екстракция на органични вещества като фенол, хлороформ и отнемащо време утаяване с изопропанол или етанол, а операцията е проста и спестява време.
Спецификации
50 Preps
Компоненти на комплекта
| Буфер ST1 |
| Буфер ST2 |
| Линеен акриламид |
| Буфер PW |
| Буфер WB |
| Буфер EB |
| Foregene протеаза |
| Колона само за ДНК |
| Инструкции |
Характеристики и предимства
-Без замърсяване с РНКаза: Колоната само с ДНК, предоставена от комплекта, прави възможно премахването на РНК от геномна ДНК без добавяне на РНКаза по време на експеримента, като се избягва замърсяването на лабораторията от екзогенна РНКаза.
-Бърза скорост: Foregene Protease има по-висока активност от подобни протеази, усвоява пробите бързо;проста операция.
-Удобно: центрофугирането се извършва при стайна температура и няма нужда от 4°C нискотемпературно центрофугиране или утаяване с етанол на ДНК.
-Безопасност: Не се изисква екстракция с органичен реагент.
-Високо качество: Извлечената геномна ДНК има големи фрагменти, без РНК, без РНКаза и изключително ниско съдържание на йони, което може да отговори на изискванията на различни експерименти.
-Система за микроелуиране: Може да увеличи концентрацията на геномна ДНК, което е удобно за откриване или експеримент надолу по веригата.
Приложение на комплекта
Подходящ е за пречистване на геномна ДНК от следните проби: букални тампони, FTA Card (петна от кръв).
Съхранение и срок на годност
-Този комплект може да се съхранява 12 месеца при сухи условия при стайна температура (15-25°C);ако трябва да се съхранява за по-дълъг период от време, може да се съхранява при 2-8°C.
Забележка: Ако се съхранява при ниска температура, разтворът е податлив на утаяване.Преди употреба не забравяйте да поставите разтвора в комплекта на стайна температура за определен период от време.Ако е необходимо, загрейте го предварително на 37°C водна баня за 10 минути, за да се разтвори утайката, и го разбъркайте преди употреба.
-Foregene Protease разтвор е с уникална формула, която е активна при продължително съхранение на стайна температура (3 месеца);неговата активност и стабилност ще бъдат по-добри, когато се съхранява при 4°C, така че се препоръчва да го съхранявате при 4°C, не забравяйте да не го съхранявате при -20°C.
Пречиствателната колона е запушена
В този комплект, в операцията за екстракция на геномна ДНК, колоната за пречистване се адсорбира директно върху сместа за ензимен лизис на пробата без етап на центрофугиране и колоната за пречистване може да бъде блокирана поради непълно ензимизиране и висок вискозитет на пробата.
Следните възможни причини са както следва:
1. Непълно ензимно смилане на тъканни проби.
Препоръка: Времето за обработка на пробата на Foregene Protease може да бъде подходящо удължено или супернатантата може да бъде взета след центрофугиране при 12 000 rpm (~13 400 × g) за 5 минути.
2. Прекомерно използване на тъканни проби или големи тъкани.
Препоръка: Най-добре е да не превишавате 1 букален тампон в пробата;ако пробата е твърде голяма, увеличете съответно дозата на буфер ST1, Foregene Protease, буфер ST2.
3. Вискозитетът на пробата е твърде висок.
Препоръка: Пробите могат да бъдат подходящо разредени с 10 mM Tris-HCl преди екстракция на геномна ДНК.
4. Фрагменти от кръвната карта са изсмукани.
Препоръка: Преходното време на центрофугиране на стъпка 6 от геномната екстракция на кръвни петна (FTA Card) може да бъде подходящо удължено.
Нисък добив или липса на ДНК
Често има различни фактори, които влияят върху добива на геномна ДНК, включително произход на пробата, условия на съхранение на пробата, подготовка на пробата, манипулация и др.
Геномна ДНК не може да бъде получена по време на екстракция
Възможните причини са следните:
1. Неправилното консервиране на проби или съхранението за твърде дълго води до разграждане на геномна ДНК.
Препоръка: Оралните тампони за предпочитане трябва да бъдат прясно взети проби и не е препоръчително да се използват консервирани тампони за операции за екстракция на геномна ДНК;пробите от кръвни петна трябва да гарантират, че качеството е квалифицирано и времето за съхранение не трябва да бъде твърде дълго.
2. Твърде малкото използване на тъкан може да доведе до липса на екстракция на съответната геномна ДНК.
Препоръка: Следвайте инструкциите за вземане на проби от букален тампон в ръководството за работа и избършете колкото е възможно повече пъти, така че достатъчно клетки да могат да бъдат прикрепени към оралния тампон за екстракция на геномна ДНК;за извличане на проби от кръвни петна, площта на рязане на кръвни петна може да бъде увеличена по подходящ начин.
3. Foregene Protease е неправилно запазена, което води до намаляване на нейната активност или инактивиране.
Препоръка: Потвърдете условията за съхранение на Foregene Protease или я заменете с нова Foregene Protease за ензимна реакция.
4. Неправилното съхранение на комплекта или времето за съхранение е твърде дълго, което води до повреда на някои компоненти в комплекта.
Препоръка: Закупете нов комплект за изолиране на ДНК от букален тампон за свързани процедури.
5. Buffer WB не добавя абсолютен етанол.
Препоръка: Потвърдете, че буферът WB добавя правилния обем абсолютен етанол.
6. Елуентът не е добавен правилно към силиконовия филм.
Препоръка: Добавете капки предварително загрят до 65 °C елуент към средата на силиконовата мембрана и оставете на стайна температура за 5 минути, за да увеличите ефективността на елуиране.
Изолирана геномна ДНК с нисък добив
Следните възможни причини са както следва:
1. Неправилното консервиране на проби или съхранението за твърде дълго води до разграждане на геномна ДНК.
Препоръка: Оралните тампони за предпочитане са прясно взети проби, а запазените тампони не трябва да се използват за екстракция на геномна ДНК.
2. Ако количеството тъканна проба е твърде малко, съдържанието на извлечената геномна ДНК ще бъде по-малко.
Препоръка: Следвайте инструкциите за вземане на проби от орален тампон в ръководството за работа, като избършете възможно най-много пъти, така че достатъчно клетки да могат да бъдат прикрепени към оралния тампон за екстракция на геномна ДНК.
3. Foregene Protease е неправилно запазена, което води до намаляване на нейната активност или инактивиране.
Препоръка: Потвърдете условията за съхранение на Foregene Protease или я заменете с нова Foregene Protease за ензимна реакция.
4. Проблеми с елуента.
Препоръка: Използвайте буфер EB за елуиране;ако използвате ddH2O или други елуенти, потвърдете, че pH на елуата е между 7,0-8,5.
5. Елуатът не е добавен правилно на капки.
Препоръка: Добавете капки елуент към средата на силиконовата мембрана и оставете на стайна температура за 5 минути, за да увеличите ефективността на елуиране.
6. Елуиращата течност се натрупва твърде малко.
Препоръка: Използвайте елуент за елуиране на геномна ДНК, както се изисква в инструкциите, поне не по-малко от 15 μl.
Ниска чистота на изолирана геномна ДНК
Ниската чистота на геномната ДНК може да доведе до неуспех или незадоволителни резултати от експерименти надолу по веригата, като например: ензимите не могат да бъдат отворени, PCR не може да получи генния фрагмент от интерес и т.н.
Възможните причини са следните:
1. Замърсяване с хетеропротеини, замърсяване с РНК.
Анализ: Колоната за пречистване не се промива с буфер PW;колоната за пречистване с промиване на буфера PW не е измита с правилната центробежна скорост.
Препоръка: Уверете се, че няма утаяване в супернатантата, преди да добавите етанол;не забравяйте да измиете колоната за пречистване според инструкциите и тази стъпка не може да бъде пропусната.
2. Замърсяване с примесни йони.
Анализ: Колоната за промиване на буфер WB за пречистване е пропусната или е промита само веднъж, което води до остатъчно йонно замърсяване.
Препоръка: Не забравяйте да измиете Buffer WB 2 пъти, както е указано, за да премахнете остатъчните йони, доколкото е възможно.
3. РНК ензимно замърсяване.
Анализ: Към буфера се добавят чужди РНКази;Операцията за промиване на буфер PW е неправилна, което води до остатъци от РНКаза, засягащи експерименталните операции на РНК надолу по веригата, като например in vitro транскрипция.
Препоръка: Комплектите за изолиране на нуклеинова киселина от серията Foregene могат да отстранят РНК без допълнително добавяне на РНКаза, поради което комплектът за изолиране на ДНК на букален тампон/FTA карта не трябва да добавя РНКаза;не забравяйте да следвате инструкциите за колона за промиване на буфер PW за пречистване и тази стъпка не може да бъде пропусната.
4. Остатък от етанол.
Анализ: Буфер WB не извърши центрофугиране на празна епруветка след промиване на колоната за пречистване.
Препоръка: Извършете правилната операция на центрофугиране на празна епруветка съгласно инструкциите.
5. Други замърсявания с примеси.
Анализ: Запазените проби или специалните проби не се обработват предварително.
Препоръка: Внимателно обработете предварително пробата според инструкциите.
