ЧЗВ е заКомплект за изолиране на тотална РНК от животни

Следният анализ на проблемите, които може да срещнете векстракция на животинска тъкан/клетъчна РНК will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

РНК не се екстрахира или добивите на РНК са ниски

Често има различни фактори, които влияят на ефективността на възстановяването, като: съдържание на РНК в тъканна проба, метод на работа, обем на елуиране и др.

1. По време на работа беше извършено центрофугиране в ледена баня или криогенно (4 °C).

Препоръка: Работете при стайна температура (15-25 °C) през целия процес, без ледена баня и центрофуга при ниски температури.

2. Неправилно съхранение на пробата или прекомерно дълго време за съхранение на пробата.

Препоръка: Съхранявайте пробите при -80 °C или замразявайте в течен азот и избягвайте многократно използване при замразяване-размразяване;опитайте се да използвате прясна тъкан или култивирани клетки за екстракция на РНК.

3. Недостатъчен лизис на пробата.

Препоръка: Когато хомогенизирате тъкан, уверете се, че тъканта е достатъчно хомогенизирана и че тъканните клетки са достатъчно разделени, за да се обясни освобождаването на РНК.

4. Елуентът не е добавен правилно.

Препоръка: Потвърдете, че ddH без РНКаза₂O се добавя на капки към средата на мембраната на колоната за пречистване.

5. Правилният обем абсолютен етанол не е добавен към буфер RL2 или буфер RW2.

Препоръка: Следвайте инструкциите, добавете правилния обем абсолютен етанол към буфер RL2 и буфер RW2 и разбъркайте добре преди да използвате комплекта.

6. Дозировката на тъканната проба не е подходяща.

Препоръка: Използвайте 10-20 mg тъкан или (1-5) × 10⁶клетки на 500 μl буфер RL1, тъй като прекомерната употреба на тъкан може да доведе до намалена екстракция на РНК.

7. Неправилен обем на елуиране или непълно елуиране.

Препоръка: Обемът на елуиране на колоната за пречистване е 50-200 μl;ако ефектът на елуиране не е задоволителен, се препоръчва да се удължи времето за поставяне при стайна температура след добавяне на предварително загрят ddH без РНКаза₂O, например за 5-10 минути.

8. Колоната за пречистване има остатък от етанол след промиване с буфер RW2.

Препоръка: Ако има остатък от етанол след промиване с буфер RW2, центрофугиране на празна епруветка за 1 минута, времето за операция на центрофугиране на празна епруветка може да се увеличи до 2 минути или колоната за пречистване може да се постави на стайна температура за 5 минути, за да се отстрани адекватно остатъчният етанол.

Пречистената РНК се разгражда

Качеството на пречистената РНК е свързано с фактори като запазване на пробата, замърсяване с РНКаза и манипулация и др.

1. Тъканните проби не се съхраняват навреме.

Препоръка: Ако тъканни проби или клетки не се използват своевременно след вземането им, незабавно криоконсервирайте при -80 °C или течен азот.За да извлечете РНК, използвайте нововзета проба от тъкан или клетка, когато е възможно.

2. Многократно замразяване-размразяване на тъканни проби.

Препоръка: Когато съхранявате тъканни проби, най-добре е да ги нарежете на малки парчета за консервиране и да премахнете едно от парчетата, когато ги използвате, за да избегнете повторно замразяване-размразяване на пробата и разграждането на РНК.

3. РНКаза се въвежда или не се носят еднократни ръкавици, маски и др. по време на операцията.

Препоръка: Експериментите за екстракция на РНК се извършват най-добре в отделни стаи за манипулиране на РНК и масата се изчиства преди експеримента.

Носете ръкавици и маски за еднократна употреба по време на експеримента, за да сведете до минимум разграждането на РНК, причинено от въвеждането на РНКаза.

4. Реагентите са замърсени с РНКаза по време на употреба.

Препоръка: Заменете с нов комплект за изолиране на обща РНК от животни за свързани експерименти.

5. Центрофужните епруветки, накрайници и т.н., използвани при манипулиране на РНК, са замърсени с РНКаза.

Препоръка: Уверете се, че всички центрофужни епруветки, накрайници, пипети и др., използвани при екстракцията на РНК, не съдържат РНКаза.

Пречистената получена РНК влияе върху експериментите надолу по веригата

РНК, пречистена от колоната за пречистване, ако солните йони, съдържанието на протеин е твърде голямо, ще повлияе на експеримента надолу по веригата, като например: обратна транскрипция, Northern Blot et al.

1. Елуираната РНК има остатъци от солни йони.

Препоръка: Потвърдете, че правилният обем етанол е добавен към буфер RW2 и извършете 2 промивки на пречистващата колона при центробежната скорост, посочена за работа;ако има някакъв остатък от солеви йони, оставете колоната за пречистване на буфер RW2 за 5 минути при стайна температура и извършете центрофугиране, за да увеличите максимално отстраняването на замърсяването със сол.

2. Етанолов остатък в елуирана РНК.

Препоръка: Потвърдете, че след промиване с буфер RW2 извършете операцията по центрофугиране на празна епруветка при скоростта на центрофугиране, посочена за работа, увеличете времето на операцията по центрофугиране на празна епруветка до 2 минути, ако все още има остатък от етанол, или го оставете на стайна температура за 5 минути след центрофугирането на празната епруветка, за да увеличите максимално отстраняването на остатъка от етанол.

Изолиране на типове проби от нулцеинова киселина

Комплектите за изолиране на РНК на Foregene могат да получат пълна изолация/екстракция на РНК от следните източници на проби: животинска тъкан, растение, клетки, вирус, кръв и др.

Как да съхранявам комплекта

Съхранение при стайна температура за 24 месеца.