Лабораторното изследване започва с вземане на проби, а вземането на проби е най-лесно да се пренебрегне.Най-важното нещо за вземане на проби е да изберете правилния тип проба, да използвате подходящи инструменти за вземане на проби и да извършите разумно транспортиране и обработка.

I. Тип на пробата

Често срещаните типове проби са както следва:

Методът за вземане на проби може да се отнася до техническите спецификации за мониторинг на околната среда на новия коронавирус на пазара за селскостопанска търговия (базар)”:

1. Проби от тампони от гърло, ръце, дрехи и други предмети на практикуващи: изисква се да се използва разтворът за запазване на вируса в епруветката за вземане на проби от вируси и да се инфилтрират напълно памучните тампони за вземане на проби.Повърхността на земята) се нанася многократно и се изплаква повече от 3 пъти.В същото време е необходимо да се извърши многоточково разпределено вземане на проби на повърхността на обекта на пробите.

2. Проби от тампони от повърхността на храната: Пробите от храна не могат да се вземат директно.Храната, която трябва да се вземе, трябва да се отдели внимателно и да се съхранява в чиста торбичка за вземане на проби, преди да се вземат проби от тампони.Изисква се да използвате разтвора за запазване на вируса в епруветката за вземане на проби от вируси, след пълно накисване на памучния тампон за вземане на проби, за многократно намазване и изплакване на повърхността на хранителната проба, която трябва да се вземе, повече от 3 пъти.В същото време е необходимо да се извърши многоточково разпределено вземане на проби върху повърхността на пробата.

3. Проби от отпадъчни води: Според разпределението на дренажната система на пазара изберете 2-3 места за вземане на проби от отпадни води, като се фокусирате върху събирането на вътрешната тръбна мрежа, надолу по течението на посоката на водния поток или връзката с общинската тръбна мрежа.За да вземете проба от тампон, потопете я в канализацията с памучен тампон за вземане на проби, за да абсорбирате канализацията и я изплакнете в епруветката за вземане на проби повече от 3 пъти.За да вземете проби от отпадъчни води, използвайте полиетиленови пластмасови бутилки, за да вземете 30-500 ml проби от отпадни води;за събиране на отпадъчни води с обем по-голям от 500 ml могат да се използват полиетиленови пластмасови кофи или специално оборудване за обогатяване на водни проби на място.В същото време е необходимо да се проведе многоточково разпределено пробовземане за мястото за вземане на проби от отпадъчни води.

4. Животински проби: За живи животни могат да се използват тампони за вземане на проби за вземане на тампони от повърхността на тялото, орофарингеални тампони и анални тампони, както и проби от екскременти или секрети също могат да бъдат събрани и съответно записани в протоколния лист.За животински проби, които са били подложени на одиране и т.н., използвайте памучни тампони, за да вземете проби от повърхността на тялото им и тампоните от телесната кухина.Необходимо е да се използва разтворът за запазване на вируса в епруветката за вземане на проби от вируси, за да се инфилтрира напълно в памучния тампон за вземане на проби и след това да се повтори нанасянето върху повърхността на хранителната проба, която трябва да се вземе.Шабу повече от 3 пъти.В същото време е необходимо да се извърши многоточково разпределено вземане на проби върху повърхността на пробата.

5. Други уреди: контейнери за транспортиране и отглеждане на животни като клетки или аквариуми.Първо, наблюдавайте или разберете специфичните видове животни, съхранявани и отглеждани в контейнера, и вземете проби от тампони върху вътрешната стена на контейнера или течни проби от съдържанието.

6. Вземете аерозолни проби в зони, където се събират хора, лошо проветрени местни търговски площи, офиси и тоалетни.

II. Инструменти за вземане на проби
1. Епруветка за вземане на кръв
Ако трябва да направите изследване на нуклеинова киселина и антикоагулантни проби по-късно, препоръчително е да използвате вакуумен кръвоносен съд, съдържащ EDTA антикоагулант, за събиране на кръв;за серумни проби се препоръчва използването на вакуумен кръвоносен съд без антикоагулант.

2. Тампон за вземане на проби

Препоръчва се използването на полипропиленови тампони вместо тампони с калциев алгинат или тампони с дървени стълбове, тъй като те могат да съдържат вещества, които инактивират определени вируси и инхибират PCR теста.Тампоните с памучни глави не могат да се използват, тъй като памучните влакна имат силна адсорбция на протеини и не се елуират лесно в последващия разтвор за консервиране.

В „Техническите спецификации за 10-в-1 смесено събиране и откриване на нови коронавирусни нуклеинови киселини“ ясно е посочено, че „тампонът за вземане на проби трябва да бъде направен от полиестер, найлон и други материали без памук и калциев алгинат, а дръжката трябва да бъде направена от недървесен материал.Точката на счупване е на около 3 см от върха на главата на тампона, което е лесно за счупване.

CDC в Съединените щати също споменава „Използвайте само тампони от синтетични влакна с пластмасови или телени валове.Не използвайте тампони с калциев алгинат или тампони с дървени валове,тъй като те могат да съдържат вещества, които инактивират някои вируси и инхибират PCR тестването.

Понастоящем широко се използва стерилен найлонов флокиращ тампон за еднократна употреба, комбиниран с пластмасова пръчка.Флокиращият тампон има по-добра абсорбция на вода и скорост на освобождаване.Според различните места за вземане на проби главата на тампона също има различни размери и влакна.Дебелината.”

3. Примерен разтвор за консервиране при транспортиране

Консервиращ разтвор за инактивиране на вируси: подходящо количество концентрация на гуанидинова сол и различни компоненти за лизиране на вируса могат директно да лизират вируса, за да освободят нуклеинова киселина, да инактивират RNase и DNase и да гарантират целостта на нуклеиновата киселина, която може да се използва за последващо qPCR откриване.Не може да се използва за култивиране и изолиране на вируси.

Разтвор за транспортиране и запазване на вируси: съдържа соли, аминокиселини, витамини, глюкоза и протеини, необходими за оцеляването на вируса, които могат да поддържат активността на вируса.Може да се използва за извличане на нуклеинова киселина и откриване на вируса в бъдеще, а също така може да се използва за култивиране и отделяне на вируса.

4. Епруветка за съхранение на проби и торба за проби

Епруветката за съхранение на пробата трябва да бъде стерилна пластмасова епруветка с капачка на винт, която не адсорбира нуклеинова киселина.Всяка епруветка за проби трябва да бъде покрита с торбичка за проби, за да се предотврати изтичане и замърсяване на пробата.

III.Интерферентни вещества в пробата

Интерферентни вещества в PCR експерименти

1. ендогенен интерферент

Веществата, присъстващи в телесната проба, могат да попречат на откриването на други вещества.

Кръв:хем (>1mg/ml), хемин (>0.1ng/μl), триглицериди, IgG и др.;

Урина:Урея (20 тМ);

Табуретка:растителни полизахариди, холат;

Тъкан:протеаза, колаген;

Мляко: протеаза, калциев йон;

лекарства: антибиотици, антивирусни лекарства, хормони и др.

друго.

2. екзогенен интерферент

Той идва от вещества, които могат да попречат на откриването на други вещества in vitro.Добавки за проби и вещества, които могат да бъдат в контакт по време на събиране и обработка на проби:

Консумативи за тестване: гел за отделяне на серума, контейнер за събиране на проби и гумена запушалка, катетър, течност за промиване на катетъра, пудра за ръкавици и др.

Антикоагулант: хепарин (>0.1 U/mL), EDTA (>0.5 mM) и др.;

Органични разтворители: изопропанол (>0,1 IU/ml), бетаин, диметилсулфоксид, формамид, глицерин, PEG и др.;

Дезинфектанти: алкохоли (етанол>1%), алдехиди, феноли (фенол>0,2%), пероксиди, силни киселини (HCL), силни основи (NaOH) и др.;

Перилен препарат:SDS (>0,005%);

Почва: Хумус

багрило: Индиго

друго.

При действителни условия на вземане на проби на открито, като например събиране на проби от околната среда, пробите може да съдържат различни смущаващи вещества и съставът на смущаващите вещества на всяко място е различен, което изисква провеждането на PCR експерименти за смущения в съответствие с местните условия.

IV.Условия за съхранение и транспортиране на пробите

Прясно събраните клинични проби трябва да се изпратят в лабораторията в рамките на 2 до 4 часа след вземането им при 2°C до 8°C.Съхранявайте при 4 ℃ в рамките на 24 часа.Пробите, използвани за изолиране на вируси и откриване на нуклеинова киселина, трябва да бъдат тествани възможно най-скоро.Пробите, които могат да бъдат тествани в рамките на 24 часа, могат да се съхраняват при 4°C;пробите, които не могат да бъдат открити в рамките на 24 часа, трябва да се съхраняват при -70°C или по-ниска (ако не - Съхранявайте при 70°C в хладилник при -20°C).

Резюме:Стандартизираното събиране, транспортиране и съхранение на пробите са от съществено значение за последващо изследване.Фалшивите отрицателни резултати на много лабораторни тестове са причинени от неправилно събиране, транспортиране и съхранение на проби, което води до разграждане на вирусната нуклеинова киселина.Много лаборатории обаче все още пренебрегват значението на вземането на проби.Надявам се, че тази статия може да събуди вниманието на всички към вземането на проби и да направи вземането на проби по-научно и разумно!

Свързан продукт:

Комплект за откриване на вариант на SARS-CoV-2 нуклеинова киселина (I) (метод на мултиплексна PCR флуоресцентна сонда) – за откриване на мутанти от Бразилия, Южна Африка и Обединеното кралство