Колко знаеш

Относно Некстракция на нуклеинова киселина

Началото и краят на пречистената нуклеинова киселина

Всичко е трудно в началото, пречистената нуклеинова киселина е най-много

Започване на молекулярни експерименти за последващи експерименти

Успехът или неуспехът оказват решаващо влияние.

Следи/ултра-следи UV спектрофотометър е предпочитан от много научни изследователи, тъй като може да открие концентрацията на нуклеинова киселина и йонните остатъци от протеини и соли просто, бързо и икономично.

Както всички знаем, A260 означава OD стойност на абсорбция на нуклеинова киселина, A280 означава OD стойност на абсорбция на протеинова концентрация, A230 означава OD стойност на абсорбция на солни йони, така че A260 може да преобразува концентрацията на нуклеинова киселина, A260/280 означава протеинов остатък, A260/230 означава остатък от солен йон, но това е просто правило, открито от изследователи въз основа на голям брой резултати от измерване, и е ”конвенционален”, за да вярваме, че може да обясни чистотата на ДНК и РНКизвестна степен.Това не е единственият стандарт за идентифициране на добива и чистотата на нуклеинова киселина, той се използва само като референтен и не е „златен стандарт“.

Ръководството на Thermo Fisher ND-2000 подчертава надеждността на резултатите от теста

Причината е, че резултатите, получени чрез използване на микро/ултрамикро UV спектрофотометър, отразяват само добива и чистотата на нуклеиновата киселина отстрани и има много влияещи фактори (оптичен път, обем на пробата, концентрация на пробата, pH стойност, други йони, които влияят на измерването на абсорбцията и т.н.), измерената стойност на OD не е непременно точна.В същото време, поради липсата на специфичност на материала за определяне на стойността на абсорбцията, едноверижна ДНК, двойноверижна ДНК, РНК, dNTPs и някои протеини имат пикове на абсорбция при 260 nm дължина на вълната и концентрацията, определена само от A260, не е непременно истинската ДНК или РНК.Концентрацията и нейната цялост и деградация не могат да бъдат оценени.

И така, как да преценим качеството на нашата пречистена нуклеинова киселина?В допълнение към използването на микро/ултрамикро UV спектрофотометър за откриване, методи като електрофореза в агарозен гел също са необходими за визуално показване на чистотата и целостта на нуклеиновата киселина и за показване на концентрацията до определена степен.По този начин добивът и чистотата на нуклеинова киселина, получени от резултатите от откриването на различни методи, са достоверни.

Сравнение на експериментална диаграма

Геномна ДНК от клетки H1299 беше извлечена с помощта на комплекти за извличане на ДНК на компания А и беше наблюдавано значително замърсяване с примеси, което доведе до високи стойности на OD

(измерена стойност на OD и съответната електроферограма)

Индекс за оценка

Има ли „златен стандарт“ за добив на нуклеинова киселина и тестване на качеството?

Доколкото знаем, няма прост, бърз и евтин метод.Независимо дали става дума за спектрофотометър, гел електрофореза или масспектрометрия, всички те отразяват концентрацията и чистотата на нуклеиновата киселина в разтвора от различни аспекти и трябва да се преценяват, като се отнасят един към друг.

Най-добрият индекс за оценка е винагипоследващото експериментално приложение.Не влияе върху ефективността на обратната транскрипция и PCR амплификацията.Получаването на надеждни продукти на амплификация и Ct стойности и получаването на пълна последователност чрез секвениране е успешна екстракция на нуклеинова киселина.

За да обобщим, гледната точка на теорията само за съотношението трябва да бъде предизвикана от гледната точка за „използване на добри експериментални резултати надолу по веригата като добри параметри за екстракция“!

Препоръчителни комплекти за екстракция на ДНК/РНК от Foregene за получаване на висока чистота на ДНК/РНК:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/