Водя

Дълга некодираща РНК, lncRNA е некодираща РНК с дължина над 200 нуклеотида, обикновено между 200-100 000 nt.lncRNA регулира генната експресия на епигенетични, транскрипционни и пост-транскрипционни нива и участва в заглушаването на X хромозомата, отпечатването на генома и модификацията на хроматина, активирането на транскрипцията, интерференцията на транскрипцията, ядрения транспорт, регулирането на клетъчния цикъл, регулирането на клетъчната диференциация и ефектите на компенсиране на дозата (ефект на компенсиране на дозата) и много други важни процеси на регулиране са тясно свързани с появата, развитието и предотвратяването на човешки заболявания и в момента са една от горещите точки в областта на биомедицината.

01  Видове и характеристики на LncRNA

lncRNA е разделена на много типове според различните източници на нейното образуване, както е показано на фигурата по-горе.Има следните характеристики:

1. lncRNA обикновено са по-дълги, с динамична експресия и различни методи на снаждане по време на диференциация
2. В сравнение с кодиращите гени, lncRNA обикновено има по-ниско ниво на експресия
3. Повечето lncRNA имат очевидна времева и пространствена експресионна специфичност в процеса на тъканна диференциация и развитие
4. Има характерни изрази при тумори и други заболявания
5. Субклетъчните местоположения на lncRNA са разнообразни
6. Последователността е с ниска степен на запазване, но функцията има определена степен на запазване и т.н.

02 Често задавани въпроси относно обратната транскрипция на LncRNA

Поради ниското съдържание на lncRNA в клетките, дългата дължина и структурата на високо ниво, такава РНК често има сложни структури като стволови бримки или фиби, а RT-qPCR е предразположен към проблеми с неуспешна обратна транскрипция или ниска ефективност.

03 LncRNA разтвор за обратна транскрипция

В централното правило процесът на РНК вируси, използващи собствена обратна транскриптаза, за да синтезират ДНК, използвайки РНК като матрица, се нарича обратна транскрипция.Процесът на използване на обратна транскриптаза на РНК вирус за синтезиране на cDNA шаблон in vitro се нарича обратна транскрипция.Основните елементи, включени в системата за обратна транскрипция: РНК шаблон, обратна транскриптаза, праймери и други компоненти.

1.РНК шаблон

Влиянието на РНК матрицата върху обратната транскрипция се отразява в нейната структура, чистота и цялост.Колкото по-висока е чистотата и целостта на извлечената РНК, толкова по-висока е ефективността на обратната транскрипция и толкова по-точни са последващите количествени резултати.РНК, пречистена с често използвани реагенти за екстракция на РНК, често съдържа остатъци от алкохол и гуанидинови соли, които имат силен инхибиторен ефект върху повечето обратни транскриптази.

2. Обратна транскриптаза

Обратната транскриптаза има ключово влияние върху цялата система за обратна транскрипция.Подходящата температура за обратната транскриптаза, използвана в повечето лаборатории, обикновено е 42°C.Всъщност отварянето на РНК структурата на високо ниво изисква по-висока температура и изискванията за обратната транскриптаза са по-високи.

3.Грунд

Праймерите за обратна транскрипция включват ген-специфични праймери, произволни праймери и Oligo dT праймери.Повечето lncRNAs не съдържат полиА опашки и е важно правилно да се свържат произволните праймери с Oligo dT.

4.Други компоненти

С оглед на факта, че РНК е особено лесна за разграждане, въвеждането на компоненти в системата за обратна транскрипция може да бъде сведено до минимум, което може ефективно да предотврати навлизането на РНКаза и да осигури гладкото протичане на обратната транскрипция.

Fорегенполучава от РНК матрица, обратна транскрипция към qPCR

Цялостно ескортирайте вашето откриване на lncRNA

Обща животинска РНК IуспокоениеКомплект (с колона за отстраняване на gDNA)

Обща клетъчна РНК IуспокоениеКомплект (с колона за отстраняване на gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (с gDNase) (супер премикс за синтез на първа верига cDNA от lncRNA)

PCR в реално време EasyTM-SYBR Green I

Aпредимства ofЕкстракция на РНК:

Комплектът използва технологията за екстракция на РНК от трето поколение, няма нужда от използване на DNase.

11 минути от 96, 24, 12 и 6-ямкови плаки, култивирани клетки, високоефективна екстракция на без gDNA, висока чистота, висококачествена тотална клетъчна РНК.

Предимства на обратната транскрипция на lncRNA:

Система за обратна транскрипция, специално разработена за LncRNA за бързо премахване на геномно ДНК замърсяване.

Системата за обратна транскрипция има висока термична стабилност и все още има добра производителност на обратна транскрипция при 50°C.

Шаблони с високо съдържание на GC и сложна вторична структура могат да бъдат обърнати с висока ефективност.

Предимстваof qPCR:

Горещ старт Foregene Taq Polymerase има по-висока ефективност на усилване, по-висока чувствителност на усилване и по-висока специфичност на усилване

Оптимизираният Real PCR Easy Mix прави SYBR Green I с по-висока чувствителност на откриване, а неговият интензитет на флуоресценция е 3-5 пъти по-голям от този на подобни продукти, което може да отговори на нуждите на различни типове количествени експерименти с флуоресценция.