Изграждане на SOP System

Създайте SOP за PCR експеримент, за да стандартизирате поведението на експерименталния персонал.

Експериментаторите стриктно спазват оперативните процедури и минимизират PCR замърсяването, което може да бъде причинено от човешки фактори, или предотвратяват появата на замърсяване по време на операцията.В допълнение, експериментаторът трябва да притежава съответните професионални знания и умения, включително умения за работа със свързано оборудване, изясняване на целия работен процес, овладяване на методите за третиране на замърсяване и лабораторни методи за контрол на качеството и способност за правилно интерпретиране на резултатите от теста.

Изграждане на стандартна PCR лаборатория

PCR лабораторията е разделена на четири зони по принцип, а именно зона за подготовка на реагенти, зона за обработка на пробата, зона за амплификация и зона за анализ на продукта на амплификация.Първите две области са зони преди усилване, а последните две области са области след усилване.Зоната преди усилване и зоната след усилване трябва да бъдат строго разделени.Експериментални материали, реактиви, хартия за запис, химикалки, почистващи материали и т.н. могат да текат само от зоната преди амплификация към зоната след амплификация, т.е. от зоната за подготовка на реагента, зоната за обработка на пробата, зоната за амплификация и зоната за анализ на продукта на амплификация, и не трябва да текат в обратна посока.Въздушният поток в лабораторията също трябва да тече от зоната преди усилване към зоната след усилване, а не в обратна посока.

Намалете експерименталните стъпки

Ако лабораторията извършва само PCR детекция и идентификация, се препоръчва да се използва флуоресцентна количествена PCR вместо конвенционална PCR.

Количествените резултати от PCR откриване на флуоресценция могат да бъдат събрани и анализирани чрез флуоресцентни сигнали, така че няма нужда да се отваря капакът за електрофореза след реакцията, което избягва замърсяването на PCR продукти, причинено от изтичане на реакционни продукти за образуване на аерозоли.Ако увеличите броя на отворите на капачката по време на етапа на зареждане на гел електрофорезата, има вероятност да възникне аерозолно замърсяване.Препоръчва се да се насърчава прилагането на количествена PCR и постепенно да се замени качествената PCR.

Приемете UNG система против замърсяване

За PCR реакцията се използва UNG анти-PCR система за замърсяване на продукта.

Системата използва dUTP вместо dTTP.След PCR реакцията всички PCR продукти (ДНК фрагменти) се включват с dUTP;в следващия кръг на PCR реакцията UNG ензимът, добавен към системата, се инкубира при 37°C за 5 минути преди PCR, който може да бъде специфичен Разградете всички ДНК фрагменти, съдържащи dUTP, и след това извършете PCR реакция.Това може напълно да премахне аерозолното замърсяване, причинено от PCR продукти.Ефектът е показан на фигурата по-долу:

Забележка: За серията директни PCR можете да изберете серийните продукти на системата за замърсяване на продукта против PCR на FJ Biotech

Предложете

За лаборатории, които извършват широкомащабни тестове за генотипиране, силно се препоръчва използването на UNG анти-PCR система за замърсяване на продукти за тестване на реагенти в допълнение към изграждането на разумни лаборатории.

Напомняне: Използването на тази система не може да премахне замърсяването на PCR продукта, което вече е причинено.Следователно UNG системата трябва да се използва в началото на съответния тест и UNG системата винаги трябва да се използва за PCR амплификация, така че да се предотврати замърсяването на PCR продуктите.Фалшиво положително.

Препоръчително е да използвате системата Direct PCR-UNG на Forge Biotech при провеждане на широкомащабни тестове, като например: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Директен PCR комплект за семена на растения-UNG；

Директен PCR комплект за животински тъкани-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Тази серия от комплекти от Foregene може не само да извършва PCR откриване бързо и в голям мащаб, но и ефективно да предотвратява и контролира замърсяването на PCR продукта.