Създайте SOP за PCR експеримент, за да стандартизирате поведението на експерименталния персонал.
Експериментаторът стриктно спазва оперативните процедури и минимизира PCR замърсяването, което може да бъде причинено от човешки фактори, или предотвратява появата на замърсяване.В допълнение, експериментаторът трябва да притежава съответните професионални знания и умения, включително умения за работа със свързано оборудване, изясняване на целия работен процес, овладяване на методите за третиране на замърсяване и лабораторни методи за контрол на качеството и способност за правилно интерпретиране на резултатите от теста.
Създайте стандартна PCR лаборатория.
PCR лабораторията е разделена на четири зони по принцип, а именно зона за подготовка на реагенти, зона за обработка на пробата, зона за амплификация и зона за анализ на продукта на амплификация.Първите две области са зони преди усилване, а последните две области са области след усилване.Зоната преди усилване и зоната след усилване трябва да бъдат строго разделени.Експериментални материали, реактиви, хартия за запис, химикалки, почистващи материали и т.н. могат да текат само от зоната преди амплификация към зоната след амплификация, т.е. от зоната за подготовка на реагента → зона за обработка на пробата → зона за амплификация → зона за анализ на продукта на амплификация, и не трябва да текат обратно.Въздушният поток в лабораторията също трябва да тече от зоната преди усилване към зоната след усилване, а не да тече обратно.Идеалният дизайн на PCR лаборатория е показан по-долу:
Фигура A: Идеален режим на PCR лабораторна настройка с отрицателно налягане в буферната стая
Фигура B: Идеален режим на PCR лабораторна настройка с положително налягане в буферната стая
Диаграмите за PCR лабораторна настройка, дадени на фигура A и фигура B, трябва да бъдат по-идеален режим на настройка и лабораторията с условия може да се позове на този режим за проектиране.За обикновени лаборатории се препоръчва зоната за PCR амплификация и зоната за анализ на продукта да могат да бъдат разделени, а отварянето на капака трябва да бъде намалено възможно най-много в зоната за подготовка на пробата и зоната за PCR амплификация.Запомнете: Продукти и експериментални консумативи в зоната за анализ на продукта е строго забранено да се носят в зоната за подготовка на пробите и зоната за PCR амплификация.
Ако лабораторията извършва само PCR детекция и идентификация, се препоръчва да се използва флуоресцентна количествена PCR вместо конвенционална PCR.
Количествените резултати от PCR откриване на флуоресценция могат да бъдат събрани и анализирани чрез флуоресцентни сигнали, така че няма нужда да отваряте капака за електрофореза след реакцията, което избягва замърсяването на PCR продукта, причинено от изтичане на реакционни продукти за образуване на аерозоли.Ако увеличите броя на отворите на капачката по време на етапа на зареждане на гел електрофорезата, има вероятност да възникне аерозолно замърсяване.Препоръчва се да се насърчава прилагането на количествена PCR и постепенно да се замени качествената PCR.
За PCR реакцията се използва UNG анти-PCR система за замърсяване на продукта.
Системата използва dUTP вместо dTTP.След PCR реакцията всички PCR продукти (ДНК фрагменти) се включват с dUTP;в следващия кръг на PCR реакцията UNG ензимът, добавен към системата, се инкубира при 37°C за 5 минути преди PCR, което може специфично да разгради всички ДНК фрагменти, съдържащи dUTP, и след това да извърши PCR реакция.Това може напълно да премахне аерозолното замърсяване, причинено от PCR продукти.Ефектът е показан на фигурата по-долу:
Забележка: За директните PCR серии можете да изберете серийните продукти на системата за анти-PCR продуктово замърсяване на ForegeneПредложете
За лаборатории, които извършват широкомащабни тестове за генотипиране, силно се препоръчва използването на UNG анти-PCR система за замърсяване на продукти за тестване на реагенти в допълнение към изграждането на разумни лаборатории.
Напомняне: Използването на тази система не може да премахне замърсяването на PCR продукта, което вече е причинено.Следователно UNG системата трябва да се използва в началото на съответния тест и UNG системата трябва да се използва за PCR амплификация, така че да се предотврати замърсяването на PCR продукти с фалшиво положителен резултат.
Препоръчва се използването на системата Direct PCR-UNG на Foregene при извършване на широкомащабни тестове, като например:
Директен PCR комплект за листа на растение-UNG；
Директен PCR комплект за семена на растения-UNG；
Директен PCR комплект за животински тъкани-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Тази серия комплекти от Foregeneможе не само да извършва PCR откриване бързо и в голям мащаб, но и ефективно да предотвратява и контролира замърсяването на PCR продукта.
Време на публикуване: 19 март 2021 г
