Следният анализ на възможни проблеми вБукалнатампон/ССТ card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Пречиствателната колона е запушена

В този комплект, в операцията за екстракция на геномна ДНК, колоната за пречистване се адсорбира директно върху сместа за ензимен лизис на пробата без етап на центрофугиране и колоната за пречистване може да бъде блокирана поради непълно ензимизиране и висок вискозитет на пробата.

Следните възможни причини са както следва:

1. Непълно ензимно смилане на тъканни проби.

Препоръка: Времето за обработка на пробата на Foregene Protease може да бъде подходящо удължено или супернатантата може да бъде взета след центрофугиране при 12 000 rpm (~13 400× g) за 5 минути.

2. Прекомерно използване на тъканни проби или големи тъкани.

Препоръка: Най-добре е да не превишавате 1Букална тампон в пробата;ако пробата е твърде голяма, увеличете съответно дозата на буфер ST1, Foregene Protease, буфер ST2.

3. Вискозитетът на пробата е твърде висок.

Препоръка: Пробите могат да бъдат подходящо разредени с 10 mM Tris-HCl преди екстракция на геномна ДНК.

4. Фрагменти от кръвната карта са изсмукани.

Препоръка: Преходното време на центрофугиране на стъпка 6 от геномната екстракция на кръвни петна (FTA Card) може да бъде подходящо удължено.

Нисък добив или липса на ДНК

Често има различни фактори, които влияят върху добива на геномна ДНК, включително произход на пробата, условия на съхранение на пробата, подготовка на пробата, манипулация и др.

Геномна ДНК не може да бъде получена по време на екстракция

Възможните причини са следните:

1. Неправилното консервиране на проби или съхранението за твърде дълго води до разграждане на геномна ДНК.

Препоръка: Оралните тампони за предпочитане трябва да бъдат прясно взети проби и не е препоръчително да се използват консервирани тампони за операции за екстракция на геномна ДНК;пробите от кръвни петна трябва да гарантират, че качеството е квалифицирано и времето за съхранение не трябва да бъде твърде дълго.

2. Твърде малкото използване на тъкан може да доведе до липса на екстракция на съответната геномна ДНК.

Препоръка: Следвайтебукаl вземете инструкции за вземане на проби в ръководството за работа и избършете възможно най-много пъти, така че достатъчно клетки да могат да бъдат прикрепени към оралния тампон за извличане на геномна ДНК;за извличане на проби от кръвни петна, площта на рязане на кръвни петна може да бъде увеличена по подходящ начин.

3. Foregene Protease е неправилно запазена, което води до намаляване на нейната активност или инактивиране.

Препоръка: Потвърдете условията за съхранение наФoregene протеаза или я заменете с нова Foregene протеаза за ензимна реакция.

4. Неправилното съхранение на комплекта или времето за съхранение е твърде дълго, което води до повреда на някои компоненти в комплекта.

Препоръка: Купете новБукална ДНК тампонизолация комплект за свързани процедури.

5. Buffer WB не добавя абсолютен етанол.

Препоръка: Потвърдете, че буферът WB добавя правилния обем абсолютен етанол.

6. Елуентът не е добавен правилно към силиконовия филм.

Препоръка: Добавете 65°Cпредварително затопленият елуент се спуска към средата на силиконовата мембрана и се оставя на стайна температура за 5 минути, за да се увеличи ефективността на елуиране.

Low-yield геномна ДНК изолиран

Следните възможни причини са както следва:

1. Неправилното консервиране на проби или съхранението за твърде дълго води до разграждане на геномна ДНК.

Препоръка: Оралните тампони за предпочитане са прясно взети проби, а запазените тампони не трябва да се използват за екстракция на геномна ДНК.

2. Ако количеството тъканна проба е твърде малко, съдържанието на извлечената геномна ДНК ще бъде по-малко.

Препоръка: Следвайте инструкциите за вземане на проби от орален тампон в ръководството за работа, като избършете възможно най-много пъти, така че достатъчно клетки да могат да бъдат прикрепени към оралния тампон за екстракция на геномна ДНК.

3. Foregene Protease е неправилно запазена, което води до намаляване на нейната активност или инактивиране.

Препоръка: Потвърдете условията за съхранение наthe Foregene Protease или я сменете с нова Foregene протеаза за ензимна реакция.

4. Проблеми с елуента.

Препоръка: Използвайте буфер EB за елуиране;ако използвате ddH₂O или други елуенти, потвърдете, че pH на елуата е между 7,0-8,5.

5. Елуатът не е добавен правилно на капки.

Препоръка: Добавете капки елуент към средата на силиконовата мембрана и оставете на стайна температура за 5 минути, за да увеличите ефективността на елуиране.

6. Елуиращата течност се натрупва твърде малко.

Препоръка: Използвайте елуент за елуиране на геномна ДНК, както се изисква в инструкциите, понене по-малко от 15μl.

Lоу чистота of геномна ДНКизолиран

Ниската чистота на геномната ДНК може да доведе до неуспех или незадоволителни резултати от експерименти надолу по веригата, като например: ензимите не могат да бъдат отворени, PCR не може да получи генния фрагмент от интерес и т.н.

Възможните причини са следните:

1. Замърсяване с хетеропротеини, замърсяване с РНК.

Анализ: Колоната за пречистване не се промива с буфер PW;колоната за пречистване с промиване на буфера PW не е измита с правилната центробежна скорост.

Препоръка: Уверете се, че няма утаяване в супернатантата, преди да добавите етанол;не забравяйте да измиете колоната за пречистване според инструкциите и тази стъпка не може да бъде пропусната.

2. Замърсяване с примесни йони.

Анализ: Колоната за промиване на буфер WB за пречистване е пропусната или е промита само веднъж, което води до остатъчно йонно замърсяване.

Препоръка: Не забравяйте да измиете Buffer WB 2 пъти, както е указано, за да премахнете остатъчните йони, доколкото е възможно.

3. РНК ензимно замърсяване.

Анализ: Към буфера се добавят чужди РНКази;Операцията за промиване на буфер PW е неправилна, което води до остатъци от РНКаза, засягащи експерименталните операции на РНК надолу по веригата, като например in vitro транскрипция.

Препоръка: Нуклеинова киселина от серия Foregeneизолационните комплекти могат да премахнат РНК без допълнително добавяне на РНКаза,по този начин Комплект за ДНК изолиране на букален тампон/FTA картанужен't добавете РНКаза;не забравяйте да следвате инструкциите за колона за промиване на буфер PW за пречистване и тази стъпка не може да бъде пропусната.

4. Остатък от етанол.

Анализ: Буфер WB не извърши центрофугиране на празна епруветка след промиване на колоната за пречистване.

Препоръка: Извършете правилната операция на центрофугиране на празна епруветка съгласно инструкциите.

5. Други замърсявания с примеси.

Анализ: Запазените проби или специалните проби не се обработват предварително.

Препоръка: Внимателно обработете предварително пробата според инструкциите.