Автори: Ван Сяоян, Джао Ерю

Звено: болница Jiaozhou, болница Dongfang, свързана с университета Tongji

Понастоящем основният тип проба за откриване на нуклеинови киселини на респираторни патогени е тампон от гърло.Има много видове често използвани разтвори за консервиране на проби, всички от които трябва да бъдат охладени или замразени за транспортиране и съхранение;Трудно е да се контролира целият процес на ниска температура по време на процеса на събиране и транспортиране и е трудно да се осигури контрол на качеството преди тестването на пробата^[1-2].

РНКаза (RNase) е ендонуклеаза, която хидролизира РНК, като основно прекъсва фосфодиестерните връзки между нуклеотидите.Молекулата на РНКазата е много стабилна, в структурата има дисулфидни връзки и нейната активност не изисква наличието на двувалентни катиони, така че РНКазата не се денатурира лесно и лесно се ренатурира дори след висока температура или използване на денатуранти.РНКазите се делят на ендогенни и екзогенни.Ендогенните РНКази могат да бъдат освободени по същото време, когато клетките се разкъсат.Следователно елиминирането на ролята на ендогенните РНКази е много критична стъпка в процеса на екстракция на РНК.Екзогенните РНКази са широко разпространени.РНКазите съществуват във въздуха, човешката кожа, коса и слюнка, което е важна причина за лесното разграждане на РНК^[3].

Заявка за данни

CANS-CL02-A009 „Прилагане на насоки за акредитация на качеството и компетентността на медицинските лаборатории в областта на молекулярната диагностика“ в техническите изисквания предлага подходящи стандарти за качество на водата да бъдат формулирани в съответствие с приложението;Херметически затворени контейнери за еднократна употреба:

РНКаза/Класификация

(1) РНКаза А

Рибонуклеаза A (RNase A), получена от говежди панкреас, е ендорибонуклеаза, която може специфично да атакува 3' края на пиримидиновите остатъци върху РНК, като разрязва цитозин или урацил, образуван от съседни нуклеотиди.Фосфодиестерна връзка, крайният продукт на реакцията е 3' пиримидинов нуклеотид и олигонуклеотид с 3' пиримидинов нуклеотид в края.

(2) РНКаза Т1

Рибонуклеаза T1 (RNase T1) се получава от Aspergillus orjzae, тя действа специфично върху 3'-терминалния фосфат на гуанина, а мястото на разцепване е между 3' фосфата на гуанина и 5' хидроксилната група на съседните нуклеотиди.Крайният продукт на реакцията е 3'гуанилова киселина и олигонуклеотидни фрагменти с 3'гуанилова киселина в края.

(3) РНКаза H

Рибонуклеаза H (RNase H) е открита за първи път от тъкан на тимус на телета и нейният кодиращ ген е клониран в Escherichia coli.Той може специфично да разгради ДНК: РНК вериги в РНК хибридни дуплекси, което води до олигонуклеотиди и мононуклеотиди с 3'-ОН и 5'-монофосфатни краища, не може да разгради едно- или двуверижна ДНК или РНК.

РНКаза

Функция и употреба

Рибонуклеазата може да катализира разграждането на рибонуклеиновата киселина (РНК) и може да бъде синтезирана изкуствено.Лечебният мехлем се използва локално за лечение на травми и болки в ставите.Според докладите рибонуклеазата може да промени метаболизма на клетката гостоприемник, да инхибира синтеза на вируса, да инхибира пролиферацията на грипен вирус in vitro и да инхибира образуването на ваксиния и херпесен вирус в пилешки ембриони.Клинична употреба на рибонуклеаза ежедневно интрамускулно инжектиране от 180 mg, полезна за лечението на епидемичен енцефалит, рибонуклеазата може да катализира разграждането на рибонуклеиновата киселина (РНК) и сега може да бъде изкуствено синтезирана.Лечебният мехлем се използва локално за лечение на травми и болки в ставите.Според докладите рибонуклеазата може да промени метаболизма на клетката гостоприемник, да инхибира синтеза на вируса, да инхибира пролиферацията на грипен вирус in vitro и да инхибира образуването на ваксиния и херпесен вирус в пилешки ембриони.Клиничната употреба на рибонуклеаза, интрамускулна ежедневна инжекция от 180 mg, е от полза за лечението на епидемичен енцефалит.

РНКаза

Определение на инхибитора

Дефиниция на единица инхибитор на РНКаза: Количеството ензим, необходимо за инхибиране на 50% от активността на 5ng РНКаза А е една единица.

Как действат РНКазните инхибитори

Гуанидин изотиоцианат:

Гуанидин изотиоцианатът е органично съединение с молекулна формула C2H6N4S.Използва се главно в биологичната медицина, химическите реагенти и др. Гуанидин изотиоцианатът е протеинов лизиращ агент и често се използва като основен компонент на лизиращия разтвор в молекулярни диагностични реагенти.Той може да лизира тъкан, да разруши клетъчната структура и да дисоциира нуклеиновата киселина от нуклеопротеина и има силна денатурация до РНКаза.Това е най-ефективният инхибитор на РНКаза в момента.

TRIzol е нов реагент за екстракция на обща РНК, който може директно да извлече обща РНК от клетки или тъкани.Съдържа вещества като фенол и гуанидин изотиоцианат, които могат бързо да разрушат клетките и да инхибират нуклеазите, освободени от клетките.

(Въпреки това гуанидин изотиоцианатът е опасен за здравето на лабораторните изследователи.)

Рназин:

Кисел гликопротеин, извлечен от черен дроб на плъх или човешка бластодерма.Рназин е неконкурентен инхибитор на РНКаза, който може да се свързва с различни РНКази, за да ги инактивира.

(Повече подробности: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hвисока температура:

Високата температура също е често срещано средство за денатуриране на протеини.

Диетилпирокарбонат (DEPC):

DEPC е силен, но непълен инхибитор на РНКаза, който може да инхибира активността на РНКаза чрез комбиниране с аминокиселинен имидазолов пръстен на активната група на РНКаза за денатуриране на протеини.

Ванадил рибонуклеозиден комплекс:

Комплекс, образуван от йони на ванадиев оксид и нуклеозиди, който се свързва с РНКаза под формата на преходни вещества, които могат почти напълно да инхибират активността на РНКаза

друго:

SDS, урея, диатомит и др. също имат известен инхибиторен ефект върху РНКазата.

Експертни прегледи

Ли Юджие Главен техник

Директор на лабораторния отдел, болница Jiaozhou, болница Dongfang, свързана с университета Tongji

За да се предотврати биоразграждането на екзогенна РНКаза, трябва да се носят маски, ръкавици и шапки и да се сменят често по време на процеса на екстракция на РНК.Всички стъклени съдове трябва да се пекат в сушилня при 200°C за повече от 2 часа.Материали, използвани за печене, като пластмаса, трябва да се третират с DEPC вода и след това да се измият с дестилирана вода.Реагентите или устройствата, използвани за извличане, консервиране и идентифициране на РНК, трябва да бъдат предназначени за РНК и трябва да се създаде независима зона за работа с РНК.

препратки:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Бактерии и вируси в назофаринкса непосредствено преди появата на остри инфекции на долните дихателни пътища при местни австралийски деца [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2018, 37 (9): 1785-1794.

[2] Клон за контрол на болничните инфекции на Китайската асоциация за превантивна медицина.Насоки за събиране и проверка на клинични микробни проби [J].Китайски вестник за болнична инфекция, 2018 (20): 3192-3200.

[3] „Клиничен тест Десет хиляди защо Молекулярна биология Тест том“