• фейсбук
  • Linkedin
  • youtube

W:Братко, обратната транскрипция е завършена и накрая последната стъпка – флуоресцентна количествена PCR!Хей, братко, какво е количествена PCR в реално време?
M:PCR винаги знаеш, нали?
W: Знаете ли, PCR е полимеразна верижна реакция и това е технология, която увеличава ДНК!
М: Това е почти... Това е технически метод за усилване на целевата последователност до повече от един милион пъти чрез специфични праймери, но това само показва наличието или отсъствието на целевата последователност и не може да определи количеството на първоначалния шаблон.Флуоресцентната количествена PCR е технически метод, разработен за решаване на този проблем.PCR в реално време и количествена PCR (qPCR) обикновено се отнасят за него.
W: Разликата от обикновената PCR е в количественото определяне на флуоресценцията?
М: Да, тоест в етапа на удължаване на всеки PCR цикъл се открива интензитетът на флуоресцентния сигнал и първоначалното количество на шаблона може да бъде изчислено според промяната на интензитета на сигнала.
У: Чувства се толкова сложно!Трябва ли да изчисля това сам?
М: Това изисква да се учиш бавно, най-добре е да можеш да разбереш принципа.Сега можете първо да се съсредоточите върху стойността на CT, която е относително интуитивна експериментална информация и нейният размер съответства на размера на първоначалната сума на шаблона.Има и графики като криви на усилване и криви на топене.Те имат последната дума дали вашият експеримент е успешен или не.
У: О, братко.Тогава ще направя qPCR експеримента!
M: Обърнете специално внимание да не добавяте шаблони към зоната с реагентите, в противен случай вашата неизползвана смес лесно ще бъде замърсена!
У: Разбрах!

1

PCR в реално време Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

По-висока ефективност, по-голяма специфичност
Висока чувствителност, добра съвместимост

2 3


Време на публикуване: 22 юли 2022 г